principes generaux des colorations en histologie

1 Colorants acides et basiques

Un colorant acide possède un "auxochrome" ayant une charge négative (exemple COO-) qui se dirigera, au cours d'une électrolyse, vers l'anode (+) : ce sont les colorants anioniques

A l'inverse un colorant basique possède un "auxochrome" chargé positivement (exemple : NH + ou H+) qui se dirigera, lors d'une électroloyse vers la cathode (-)

Ce caractère d'acide ou de base s'appliquant à "l'auxochrome" n'implique pas forcément le caractère acide ou basique de la solution colorante.

Les colorants acides (ou plutôt anioniques) se présentent le plus souvent sous forme de sels de sodium ou de calcium (exemple : éosine = sel de sodium, qui colore certaines substances, et notamment les cytoplasmes cellulaires en rose on parlera de substances "éosinophiles"

Les colorants basiques (ou plutôt cathiniques) se présentent le plus souvent sous forme de chlorures ou de sulfates (c'est le cas de l'hématoéine ou de l'hémalun qui colorent en bleu les substances telles que les noyaux : on parle de substances cyanohiles plutôt que basophiles.

2 Classification des colorants

il s'agit de plus en plus souvent de colorants de synthèse. Quelques uns néanmoins, d'origine naturelle, sont couramment utilisés : c'est le cas du safran, de l'indigo, de l'orcéine et de l'hématoxyline.

3 Mécanismes de la coloration

des facteurs chimiques interviennent le plus souvent. exemple : l'hématéine (NH+) va se fixer sur les acides phosphoriques des noyax et l'éosine (CO-) se fixe sur les groupements positifs des protéines cytoplasmqiues. mais d'autres facterus interviennent :
facteurs physiques
facteurs de pénétration mécanique dans la coupe qui mesure 5 microns d'épaisseur
des facteurs température
Il faut noter que les laques sont parois nécessaires à la fixation de certains colorants, ou certains mordants (phénomènes de mordançage

PRINCIPALES METHODES DE COLORATIONS

On utilise plusieurs modalités.

des colorations progressives : par séjour de la substance à colorer dans le colorant, pendant un temps optimum au bout duquel on effectue un lavage
des colorations régressives : sur coloration et élimination de l'excès de colorant par un différenciateur (alcool par exemple). C'est le cas de l'éosine qui colore les cytoplasmes et les noyaux en rouge. la différenciation ermet déliminer la coloration nucléaire alors que la coloration cytoplasmique persiste.

colorations simples	exemple de la mise en évidence des noyaux seuls par le picro-carmin
colorations combinées	on utilise plusieurs colorants les uns après les autres. C'est l'exemple de la coloration standard par l'hématéine-éosine-safran.
	Déparaffinage : deux bains de xylène On enlève le xylène dans deux bains d'alcool absolu On réhydrate en "descendant" les alcools jusqu'à 70° Rinçage
Coloration nucléaire par l'hématoxyline ou hémalun	différenciation rapide facultative dans une solution de carbonate de lithium ou simplement rinçage à l'eau courante.
Coloration cytoplasmique dans l'éosine	Lavage Déshydratation (on "remonte" les alcools : 70°, 95° , 100°) Coloration par le safran (en solution alcoolique) : passage rapide. Passage dans l'alcool pour enlever l'excès de safran Xylène Montage